飼料油脂乳制品霉菌素測(cè)定儀糧油食品檢測(cè)

ST-2000A霉菌毒素測(cè)定儀是當(dāng)前、酶聯(lián)免疫等分析*的一種分析儀器。采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理，即酶聯(lián)免疫法，由本儀器與B1試劑盒二大件組成，能*、定量測(cè)定樣品中B1的含量(如配其他試劑盒，可測(cè)其他毒素)，廣泛應(yīng)用于糧食、食品、飼料、油脂、乳制品、藥物、飲料、酒等產(chǎn)品的B1及其他霉菌毒素的檢測(cè)。

性能特點(diǎn)：飼料油脂乳制品霉菌素測(cè)定儀糧油食品檢測(cè)飼料油脂乳制品霉菌素測(cè)定儀糧油食品檢測(cè)

1. 顯示操作：彩色液晶屏、可視話布板、顯示整板信息、觸摸屏操作

2、振板功能：3 級(jí)振板速度、時(shí)間 0-255 秒可調(diào)

3、工 作 站：專(zhuān)業(yè)的酶標(biāo)儀軟件，可存儲(chǔ) 500 組程序、100000 個(gè) 樣本結(jié)果，提供吸光度、線性方程、對(duì)數(shù)方程、二次方程、三次方程、吸光度百分比-濃度對(duì)數(shù)方程、樣條函數(shù)、抑制率等豐富的計(jì)算模式

技術(shù)參數(shù)：

光 源：DC12V  22W  進(jìn)口鹵素?zé)?/span>

波長(zhǎng)范圍：400-900nm

濾 光 片：標(biāo)配 405、450、492、630nm，其它波長(zhǎng)可選配

讀數(shù)范圍：0-4.000Abs

分 辨 率：0.001Abs

示值誤差：≤±0.01Abs

穩(wěn) 定 性：≤±0.003Abs

重 復(fù) 性：≤0.3%

尺寸：400mm(L)*260mm(W)*200mm(H)      

1 原理及用途

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)谷物、飼料等樣品中的B1（Aflatoxin B1，AFB1），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗B1抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含B1含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度：0.03ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min

2.3 檢測(cè)下限：

谷物……………………………………0.15ppb

配合飼料………………………………0.3ppb

食用油、花生…………………………0.6ppb

醬類(lèi)、麥類(lèi)等飼料……………………0.3ppb

啤酒……………………………………0.3ppb

葡萄酒、醬油、醋……………………0.15ppb

2.4 交叉反應(yīng)率：

B1…………………………100%

2.5 樣本回收率：

谷物及配合飼料……………………85%±15%

花生…………………………………82±15%

食用油………………………………85±15%

醬類(lèi)、麥類(lèi)等飼料………………83±15%

啤酒………………………………84±15%

葡萄酒、醬油、醋………………87±15%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)液（黑蓋）：各1ml

0ppb、0.03ppb、0.06ppb、0.12ppb、0.24ppb、0.48ppb

高標(biāo)準(zhǔn)液：100ppb…………………1ml

酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………5.5ml

抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

說(shuō)明書(shū)………………………………1份

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器：測(cè)定儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：?jiǎn)蔚?0µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑：甲醇、正己烷、或甲烷

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液：

配液1：樣品提取液

   70%甲醇，即V甲醇:V去離子水=7：3。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 谷物處理方法

1）稱(chēng)取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加5ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去離子水，混勻；

3）取50μl進(jìn)行分析。

   樣本稀釋倍數(shù)：5    檢測(cè)下限：0.15ppb

5.3.2 玉米皮、麥麩等吸水性強(qiáng)的樣本處理方法

1）稱(chēng)取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加20ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去離子水，混勻；（對(duì)于毒素含量*的樣本可用35%的甲醇稀釋后再測(cè)。比如取2）中的混合液0.1ml加35%的甲醇0.9ml混勻，終樣本稀釋倍數(shù)為200，檢測(cè)下限為6ppb。）

3）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：20    檢測(cè)下限：0.6ppb

注：由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態(tài)，取樣時(shí)需多點(diǎn)取樣充分混勻后再取2g進(jìn)行試驗(yàn)。

5.3.3 配合飼料處理方法

1）稱(chēng)取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加10ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去離子水，混勻；

3）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：10    檢測(cè)下限：0.3ppb

5.3.4 食用油、花生、高油脂的飼料處理方法

1）稱(chēng)取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加8ml正己烷和10ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）去除上層液體，取0.5ml下層液體加入0.5ml去離子水，混勻，再取混勻液體0.5ml加入0.5ml 35%甲醇，振蕩30S；

3）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：20    檢測(cè)下限：0.6ppb

5.3.5 醬類(lèi)、麥類(lèi)、餅干、糕點(diǎn)等食品或調(diào)料，以及飼料濃縮料等飼料處理方法

1）稱(chēng)取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加10ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取2ml上清，加入4ml），振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

3）轉(zhuǎn)移上層液體到另一容器中，下層液留置備用，向上層液中再加入4ml甲烷），充分振蕩混5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

4）去除上層液體，合并兩次的下層液體并充分混勻；

5）取合并后的下層液體2ml于50-60℃氮?dú)庀麓蹈桑?/span>

6）加入0.5ml樣品提取液充分溶解干燥物，再加入0.5ml去離子水混勻；

7）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：10    檢測(cè)下限：0.3ppb

5.3.6 啤酒處理方法

1）將啤酒充分?jǐn)嚢瑁ㄈコ鼵O2），取2ml啤酒樣品，加入1ml蒸餾水，再加入7ml甲醇，振蕩5分鐘；

2）取混勻后的樣品液0.5ml加入0.5ml去離子水，混勻；

3）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：10    檢測(cè)下限：0.3ppb

5.3.7 葡萄酒、醬油、醋處理方法

1）取2ml樣品，加入2ml蒸餾水，再加入10ml，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取下層液體1ml于50-60℃氮?dú)庀麓蹈桑?/span>

3）加入0.5ml樣品提取液充分溶解干燥物，再加入0.5ml去離子水，混勻；

5）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：5    檢測(cè)下限：0.15ppb

6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

6.1 編    號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。

6.3 洗    滌：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

6.4 顯    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。

6.5 終    止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

6.6 測(cè)吸光值：用測(cè)定儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成

6.7 ST-2000A自動(dòng)測(cè)定儀自動(dòng)完成測(cè)定，自動(dòng)出結(jié)果。